Требования к качеству материала для определения мутации гена EGFR

 

     Для молекулярно-генетического  исследования используется операционный или биопсийный материал, а также «архивные блоки», т.е. залитые в парафин опухолевые ткани.

 

     В качестве источника опухолевой ткани может использоваться может быть как первичное новообразование, так и метастаз. Время забора биологического материала не имеет значения: биопсийный материал, взятый на этапе  диагностики, операционный материал, а также ткань, полученная из метастазов, полностью пригодны для анализа.

 

     Абсолютно допустимо запрашивать из патоморфологического архива препараты, изготовленные несколько лет назад.

 

 

 

Содержание опухолевых клеток

 

     Поскольку для определения наличия или отсутствия мутации гена EGFR важно выделить достаточное количество ДНК, одним из главных критериев пригодности биологического материала является большое содержание опухолевых клеток.  Примерное количество клеток, забираемых при биопсии.

 

 

     Для того, чтобы результаты тестирования адекватно отражали наличие/отсутствие генетических изменений в опухоли содержание опухолевых клеток в препарате должно быть:

  • оптимально – не менее 50%
  • минимально – 20%
  • в других случаях необходимо проведение макро- или микродиссекции (изоляции отдельных клеток с необходимыми характеристиками)

     Наличие   гистологического препарата,   полученного непосредственно из среза опухоли («стекла-отпечатка») в комплекте с «парафиновым  блоком» заметно упрощает процедуру выделения опухолевых клеток для молекулярно-генетического анализа.

 

 

Условия фиксации ткани

 

     Другой фактор, оказывающий решающее влияние на точность и достоверность результата исследования -  условия обработки (фиксации) , которую претерпел материал до того , как из него  было решено выделить ДНК.  Фиксация ткани формалином  -  стандартная процедура необходимая для обеспечения сохранности биологического  материала, однако, химически взаимодействуя с нуклеиновыми кислотами (ДНК, РНК), формалин стимулирует их разрушение и делает их непригодными для молекулярно-генетических манипуляций.

 

 

Требования к качеству материала для определения мутации гена EGFR

 

     Чтобы минимизировать повреждение ДНК при фиксации материала важно учитывать:

 

время от взятия образца до фиксации:

  • фиксация должна быть проведена    не более, чем через 1 час после взятия ткани, поскольку в нефиксированном материале происходит ферментативное разрушение клеток
  • недопустима фиксация материала на следующий день.

 

тип фиксации:

  • приемлемой матрицей для генотипирования является ДНК, выделенная из тканей, фиксированных в 10% забуференном формалине и залитых в парафиновые блоки

 

 

  • также пригодные образцы ДНК можно получить из тканей, фиксированных в этаноле или ацетоне и залитые в парафин
  • несколько худшие результаты получаются при фиксации материала фиксаторами Кларка и Замбони, формалином/этанолом/уксусной кислотой
  • совсем непригодны - фиксаторы Ценкера, Карнуа, Буэна. Также обработка биологических препаратов кислыми растворами, в том числе незабуференным формалином , обычно приводит к деградации ДНК и тем самым препятствует проведению молекулярно-генетического тестирования.
 

оптимальное время фиксации:

  • для операционного материала – 12 - 24 ч
  • для биопсийного материала  6 - 8 ч

 

     При увеличении времени фиксации (более 1-3-х суток) ДНК претерпевает необратимые изменения.

 

 


Последняя новость:

Информируем Вас, что с 07 ноября 2016 года Программа «Совершенствование молекулярно-генетической диагностики в Российской Федерации» расширяется

Читать подробнее