Требование к качеству материала для диагностики транслокации ALK методом FISH

 

Для молекулярно-генетического  исследования используется операционный или биопсийный материал, а также «архивные блоки», т.е. залитые в парафин опухолевые ткани.

 

В качестве источника опухолевой ткани может использоваться может быть как первичное новообразование, так и метастаз. Время забора биологического материала не имеет значения: биопсийный материал, взятый на этапе  диагностики, операционный материал, а также ткань, полученная из метастазов, полностью пригодны для анализа.

 

Абсолютно допустимо запрашивать из патоморфологического архива препараты, изготовленные несколько лет назад.

 

 

Откуда нужно брать биопсию? [19]

– место биопсии должно быть выбрано врачом, выполняющим процедуру

– обычно биопсию выполняют из наиболее легко доступной точки опухоли

– для патоморфологического исследования приемлема любая локализация биоптатов:

  •   первичная опухоль
  •   лимфатические узлы
  •   отдаленные метастазы

– для оценки потенциальных различий мутационного статуса первичной опухоли и метастазов необходимо проведение дополнительного исследования

 

Какую методику биопсии нужно использовать?

– может использоваться несколько хорошо известных методик биопсии [19]:

  •   толстоигольная
  •   трансбронхиальная
  •   эндобронхиальная
  •   игольная, под контролем КТ
  •   в процессе медиастиноскопии
  •   в процессе эндоскопического вмешательства на грудной клетке или торакотомии

– для выполнения биопсии лимфатических узлов уже использовалась новая методика, в частности трансбронхиальная аспирационная биопсия под контролем эндобронхиального ультразвукового исследования (EBUS-TBNA) [20].

 

Подготовка биопсийного материала

– предпочтительный фиксирующий раствор – 10 % нейтральный забуференный формалин [19] 

  • не допускается использование фиксатора Буэна
  • использование других фиксирующих растворов не было валидировано

– длительность фиксирования должна быть минимальной[19]

  • 6 – 18 часов, в зависимости от размеров образца  

            – не более 48 часов – для FISH или методов, предусматривающих анализ РНК [21]

 

Содержание опухолевых клеток

Поскольку для определения наличия или отсутствия мутации гена ALK, одним из главных критериев пригодности биологического материала является большое содержание опухолевых клеток.  Примерное количество клеток, забираемых при биопсии.[19]

 

 

– содержание опухолевых клеток необходимо оценить до выполнения молекулярного тестирования

– в идеале для выполнения анализа мутаций необходимо 200 – 400 опухолевых клеток

– для проведения FISH  необходимо наличие не менее 50 опухолевых клеток

 

Подготовка и окрашивание образца для FISH [22]

 

 

– для получения точного результата следует сосчитать, по крайней мере, 50 опухолевых клеток [23]

– сигнал FISH расценивается как положительный в отношении инверсии, если красный и зеленый зонды разделены расстоянием, соответствующим >2 диаметров сигнала [23]

– ложноположительное расщепление может иметь место приблизительно в 5 % – 10 % клеток [18]

– повышение доли клеток с перестройкой ALK, не коррелирует с выраженностью ответа опухоли на кризотиниб [24]

 


Последняя новость:

Информируем Вас, что с 07 ноября 2016 года Программа «Совершенствование молекулярно-генетической диагностики в Российской Федерации» расширяется

Читать подробнее